污染的293T-100X
经常培养细胞的同学们,可能都遇到过上图的情况,突然有一天,显微镜下发现培养基里有为数不少的“小黑杆”,它们有些知识随着液体晃动,有些会自主地在液体里迅速或者缓慢地游动。这些“小黑杆”,也会被我们的客户形象地称为“有黑色的虫子”。那这些“小黑杆”到底是什么呢?
出现“小黑杆”最常见的可能
细菌污染外观
各类细菌
细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染,即使在细胞培养液中加入了抗菌素,也可能因为操作不慎而引起污染。常见的有革兰氏阳性菌,如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌。其中,不乏各类杆状细菌,在显微镜下这些杆菌看起来就像“小黑杆”一样。
培养细胞受细菌污染后,初期细胞仍能生长,但随着细菌的迅速增殖,会出现培养液变混浊,pH改变从而导致培养基颜色发生变化。随着污染的加重,细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,后变圆脱落死亡。
出现“小黑杆”特殊情况
原虫
原虫为单细胞真核动物,在自然界分布广泛,种类繁多,约有近万种为寄生性原虫,生活在动物体内或体表。
细胞实验中细胞受到原虫污染后,培养基轻微浑浊,镜下可以观察到众多的细小点状物,轻微活动。细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢,而且细胞状态不好,边缘不清楚,细胞不透亮,在光镜下观察常可见到细胞核及胞浆内出现大小不等的颗粒或空泡。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养,但在污染初期原虫的数量少,细胞还能占据优势,所以不会影响到细胞的正常生长,只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长,最终形成恶性循环。(对于原虫的定义,业内仍然存在一定的讨论空间,也有研究者认为原虫污染属于细菌类污染)
螨虫
螨虫属于节肢动物门蛛形纲广腹亚纲的一类体型微小的动物,身体大小一般都在0.5毫米左右,有些小到0.1毫米,大多数种类小于1毫米。世界上已发现螨虫(mite)有50000多种,仅次于昆虫。螨虫污染在细胞系培养中十分少见,常见于原代培养皮肤成纤维细胞时,形态呈杆状,能自主直线游动,速度相当快,常常源自实验动物的毛发中。