一、细胞介绍

bend.3 细胞用表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒转染进行转化。观察到血管性血友病因子的表达及对荧光标记的低密度脂蛋白（LDL）的摄入确认其内皮细胞特性。bEnd.3 cells细胞可用细胞因子和脂多糖(LPS)诱导淋巴细胞的Peyer's结高内皮细胞受体， 粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及内皮细胞选择素的表达。肿瘤坏死因子 a (TNF alpha), 白介素 1 (IL-1)或 LPS的诱导作用是浓度及时间依赖的。代数较早的bEnd.3细胞未受刺激时在表面表达MAdCAM-1，但过了30代后就不表达了。细胞粘附分子 1 (ICAM-1)持续表达，并在LPS, IL-1 and TNF a处理后升高。30代前血管细胞粘附分子 1 (VCAM-1)持续表达，但30代后不表达。bEnd.3细胞中肿瘤坏死因子a (TNF alpha)可以诱导P-选择素的表达，30代后更强。

细胞名称：小鼠脑微血管内皮细胞株

二、培养注意点

（1）、bend.3细胞培养时间越长越难消化，若出现单次消化时间过长，可进行分次消化，若将细胞强行吹打下来易造成细胞机械损伤。

（2）、bend.3细胞形态较为杂乱有些是扁平的，有些像鹅卵石状，有些像成纤维状细胞。还有会出现放射状细胞，易造成细胞已铺满的错觉，传代时注意细胞密度，不要被误导了。

三、复苏细胞到货处理

1.观察

（1）、收到细胞后，请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一致以及培养瓶是否有破损或漏液等异常情况

2.处理

（1）、用75%酒精棉球擦拭 T25 细胞培养瓶外部，将细胞放入37度培养箱中静置 3-4 小时后再做处理。

（2）、显微镜观察细胞生长情况若完全贴壁，可以根据细胞密度来进行传代或者换液继续培养（首次传代建议1:2）。

3. 在显微镜下观察细胞，若没有完全贴壁，漂浮较多，进行以下操作：

（1）将瓶中培养基转入离心管中进行离心（1000rpm，5min），离心完，弃掉上清。

（2）沉淀消化2-3分钟后，加入完全培养基进行离心收集沉淀。

（3）加入新鲜完全培养基5-8ml，吹匀细胞沉淀后转入新培养瓶内，放入培养箱中培养。

四、冻存细胞到货处理

1.检查

（1）、收到细胞后，检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等 问题，请即时联系。

（2）、将细胞取出转移至液氮或－80度冰箱保存，建议尽早复苏。

（3）、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系，会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。

特别说明：未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。

2.细胞复苏

（1）、 从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

（2）、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

（3）、弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种 T25 培养瓶，于 37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；

（4）、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养。