原因：操作时未严格遵守无菌原则，如实验器材消毒不彻底、实验环境有细菌等。细菌在培养液中繁殖，抢夺营养并释放毒素，致使细胞大量死亡。

检测：培养液变浑浊，显微镜下可见细菌形态微生物。可进行细菌培养实验进一步确认。

解决：丢弃污染细胞和试剂，全面消毒设备与环境，重新严格无菌操作培养。

原因：环境孢子传入，通过空气或器材进入培养体系。真菌生长形成菌丝和孢子，影响细胞生长环境。

检测：培养液出现丝状或絮状物质，显微镜下可观察到真菌结构。

解决：同细菌污染处理，可添加抗真菌剂预防，但需注意其对细胞的毒性。

原因：支原体极小，可通过多种途径污染细胞，如试剂、人员、器材等。它干扰细胞正常功能。

检测：用支原体特异性检测试剂盒，或观察细胞生长特性变化判断。

解决：可尝试用清除剂，严重时丢弃污染细胞，重新复苏，加强防控措施。

原因：培养箱故障、电源不稳定或频繁开关门等致温度波动。3T3 细胞对温度敏感，适宜 37℃左右。

检测：用校准温度计测培养箱温度，看记录曲线有无异常。

解决：确保培养箱正常运行，定期维护校准，避免频繁开关门，温度异常时及时调整并观察细胞恢复情况。

原因：CO₂浓度变化、酸碱物质积累或缓冲体系失效等。适宜 pH 值为 7.2 - 7.4，异常影响细胞内酶活性和蛋白质功能。

检测：用 pH 计测培养液 pH 值，或通过细胞形态初步判断。

解决：维持 CO₂浓度稳定，定期换培养液，保证缓冲体系有效，pH 异常时适当调节。

原因：试剂浓度错误、水分蒸发或代谢产物积累等。渗透压异常影响细胞水分平衡和生理功能。

检测：用渗透压计检测。

解决：按配方准确配制培养液，保持体积稳定，异常时调整渗透压至合适范围。

原因：传代次数增加，细胞遗传物质和功能改变，增殖能力下降，对环境适应力减弱。培养应激因素也会加速老化。

检测：细胞变大变扁平，有空泡，生长速度减慢，倍增时间延长。可检测细胞端粒长度等指标辅助判断。

解决：及时更换年轻细胞株，优化培养条件，减少应激因素，如提供充足营养、控制氧化应激等。

原因：胰蛋白酶消化过度或不足、传代时细胞密度不合适、接种过程中细胞损伤等。

检测：观察细胞形态和生长情况，消化过度细胞破碎，不足则细胞成团。

解决：准确掌握胰蛋白酶消化时间和浓度，合理控制传代细胞密度，轻柔操作避免细胞损伤。