- 在培养过程中你是否遇到过细胞突然长出“小角”?这个到底是什么?
- 其实这个“小角”俗称细胞的“伪足”是细胞分化导致的,虽然不影响细胞生长,但会影响到后期实验效果。那该如何避免它的发生,我们一起来研究一下。
培养条件:DMEM(高糖)+10%FBS+1%P/S
首先观察下分化和不分化的生长形态是怎样的?
Raw264.7 图1(未分化前)
RAW264.7(分化后)图2 仅供参考
图1 为细胞正常形态呈不规则圆形,贴壁生长,未见触角
图2 可以清晰看见细胞长出长长的角,可见细胞已经分化
如何收起他的小脾气?
培养注意事项
01、该细胞传代时不需要用胰酶消化,长时间的胰酶消 化会使细胞分化,长出伪足,小脾气就冒出来啦!
02、传代时使用无菌细胞刮刀刮拭培养表面将细胞刮落,收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。
03、传代比例,尽量使细胞密度高于30%。
04、需使用较好的血清来进行培养。
正确的传代步骤
01、用无菌细胞刮刀刮拭培养表面将细胞刮落
02、将刮下来的细胞用15ml离心管离心收集
03、1000rpm 离心5分钟
04、去上清,用新鲜的完全培养基将细胞重悬
05、按比例接种到新的培养器皿中
小知识:RAW 264.7细胞系的起源
加利福尼亚索尔克研究所的W. C. Raschke在雄性BAB/14小鼠腹腔注射A-MuLV(Abelson鼠科白血病病毒)诱发肿瘤的腹水中建立了RAW 264细胞系。他发现RAW 264可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖,并且能通过抗体依赖途径分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。RAW 264.7不分泌A-MuLV(但用Moloney MuLV 拯救后可以在上清检测到病毒),对LPS非常敏感。该研究1978年发表在《CELL》杂志。