wb条带和理论大小不一致，应该怎么办❓

遇到这种情况呢很正常，先别慌～排查一下可能原因吧！ ✅1、蛋白marker有问题，指示大小不够准确 换不同品牌的marker观察有没有差异，这种例子比较少，一般情况下marker指示位置都没问题 ✅2、基因本身存在多个转录本 可以去NCBI查阅是否存在？不同转录本翻译出的蛋白质大小可能也有差别，抗体可能识别了另一个 ✅3、蛋白质本身存在翻译后修饰or剪切 例如糖基化，磷酸化等可能增大蛋白分子量，有些蛋白也会翻译后形成剪切体or异构体，可查阅相关文献check一下是否存在这种情况 ✅4、蛋白二聚体or多聚体的形成 主要是和蛋白样品有关 ➡️在样本制备过程中，要用质量好且新鲜的loading buffer去结合裂解液，保持蛋白的单体状态； ➡️样本制备好后可分装冻于负80，每次上样前再复煮3分钟，使其与loading buffer充分融合，因为有时样品冻存后loading成分会析出❗️ ➡️部分膜蛋白100度煮会形成多聚体，导致分子量变大，但不是所有都这样，建议设置温度梯度再跑胶摸一下条件，可以设置：30度，50度，70度，90度，100度❗️ ✅5、蛋白相对电荷变化 正常情况下电泳液里的SDS可以中和蛋白质电荷，使其只依赖分子量跑开 ➡️若目的蛋白含有带正电的氨基酸比例很高，SDS无法全部覆盖，就可能影响电泳速度，进而分子量和理论上有差异～ ➡️若一个蛋白富含疏水氨基酸，结合的SDS就会变多，SDS带负电，携带负电荷变多电泳就会加快，所以这种蛋白的分子量可能比理论上要小 因此可以查下蛋白氨基酸序列，判断分子量是否和蛋白本身性质有关❗️ ✅6、一抗本身的识别问题 具体原因尚不清楚，大家拿到一抗以后首先翻阅说明书，看一下说明书标注的蛋白理论分子量和实际观察到的分子量分别是多少❓很多都会不一致，但差别不大～ 然后我们根据自己操作，是否和说明书一致？差别不大，条带特异，且每次电泳蛋白位置都差不多，就没问题❗️ 若分子量差异过大，可换不同牌子的一抗试一下，以及排除一下上面提到的可能～