做cck8一定要避的坑‼️快对96孔板pstd了…

被96孔板硬控两个月了，天天就是铺板，排枪用的快腱鞘炎了，好在比较幸运，做出了一些结果。[泪崩R] 从初筛4000个化合物➡️到复筛的挑选➡️到作用于多个目的细胞摸使用浓度，测ic50➡️到作用于临床样本（正常or病人）➡️再到测各种需要的指标… 用时2个多月，对96孔板真的要pstd了，现在看到96孔板，就生理性抗拒➕厌烦。[泪崩R] 测luci筛出来以后做的最多的就是cck8，各种测，中间也重复过，总结一下我踩的坑和小经验，大家可以避开～ 🌟1、若是加药测细胞活力，首先判断💊是否带有颜色？若有颜色很可能与cck8/MTT反应，导致所有孔的od值乱乱的，这是需要做阴性对照，也就是：没有细胞，只加药的孔～ 最后：有细胞的孔od值➖阴性对照od值🟰最终od值 🌟2、96孔板四周边缘的孔，不要加细胞检测，有概率污染，可以用pbs补充。 🌟3、96孔板有些盖子和孔板不是很贴合，盖上以后检查一下是否完全盖上了？有些孔板需要大力磕一下才能完全盖上，盖不紧的话容易污染。 🌟4、处理24小时可以用100ul细胞悬液，若处理48小时甚至更久，建议用200ul细胞悬液，但细胞量不变，只改变体积即可！细胞量可用1万/100ul～ 🌟5、可做5个复孔，od值测出来后，舍去醉大值and醉小值，剩下的3个值作图，尽可能减少非必要的重复🔁！ 🌟6、酶标仪测吸光度时，尽量不要有气泡，若有过多气泡，如果实验室有吹风机，可以用吹风机斜着吹1～2秒，气泡会立马消失的，不会影响结果～ 🌟7、96孔板铺板不需要混匀，细胞加进去即可，加药，加cck8以后，用手轻拍孔板侧边，可以混匀，然后再放入培养箱。 🌟8、贴壁细胞比较简单，可换液，悬浮细胞铺板以后就不要再换液了。 ps：关于cck8加药时，倍比稀释法的具体操作可看上个视频的详细讲解哦～[棒R]