经验贴～分享下跑了5年wb的心得🥸

现在每次做感觉都可以，重复次数也比较少，很多都是一次出结果，基本可以做到背景干净，条带清晰～分享一些经验叭！ wb包括：样品制备，配胶（预制胶除外），电泳，孵一抗，洗膜，孵二抗，洗膜，发光。每一步需要注意的事项都写在P2和P3的总结啦～[喝奶茶R] ✅配胶： 1、分离胶大概长度配多长？（P4） 2、分离胶凝固后用纸巾把水或乙醇吸干，紧接着可以把胶架倒置（P5） 3、1.5mm梳子容易拔歪，如果拔歪了可以再把1.0mm梳子插进去，可以归正（P6） 4、胶的保存（P7） 短期保存（1-2天推荐泡水里），长期保存（1周）推荐用保鲜膜或保鲜袋沾点水包起来 ✅转膜（P8） 如果用的是卷筒的PVDF膜，膜可能会弯曲，建议大家凸的那一面去贴合胶，这样会更贴合。 ✅裁膜（P9～P13） 1、裁膜时每个条带保证有2条以上的marker，不要裁成“面条”状，容易原图审核不过 2、可以用保鲜袋装膜，隔着保鲜膜在膜上做标记 3、不要标记在条带位置和marker上，可以写在marker旁边 4、新手可以使用尺子和笔去划线，然后再裁膜，就会裁的比较整齐 5、用清晰可见的marker，不然发光时很容易看不到 🌟个人最近用的是Cytiva的彩虹marker，有3种规格，全分子量，低分子量，高分子量都有，几乎适配所有蛋白～[喝奶茶R] 🌟而且Cytiva的marker用很少的量就清晰可见了，图上用的是2ul，适配范围也广，传统胶，预混胶，预制胶都可以用，尊嘟很nice～😇 [害羞R]最后膜曝光时，发光液也是Cytiva，很好用～他们家产品感觉都挺不错，发光液也是AB液一比一混合使用的。 🌟丰度高的给蛋白，例如内参，不到1s就可以显出条带；丰度正常的蛋白，孵过3个目的，分别是8s，3s，25s显出条带 🌟除此之外，显出的条带背景都比较干净，Cytiva发光液值得拥有～ 🌟建议：如果蛋白丰度较高，可能容易出现烧膜的现象，建议上样量减半，或稀释发光液，用tbst稀释即可～[棒R]