胃癌是一种常见的恶性肿瘤，其发病率在全球范围内处于前列。目前，根据世界卫生组织的分类，胃癌分为两种主要类型：分化型胃癌和非分化型胃癌。
而且，胃癌常常被诊断为晚期，限制了治疗的机会。因此，寻找新的抗癌治疗策略成为了一个紧迫的任务。过去的研究表明，在胃癌细胞中，TRAIL（肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体）启动的凋亡途径异常增加。
因此，介导TRAIL凋亡途径的治疗策略已引起了研究人员的极大兴趣。 组织蛋白酶B（TPB）作为一种新型的治疗策略已被广泛研究和应用。
然而，TPB与TRAIL联合对胃癌细胞凋亡的作用仍未得到深入的研究。因此，本研究旨在探索TPB与TRAIL联合引起胃癌细胞凋亡的作用，并为开发针对胃癌的组合治疗策略提供新突破。
在此论文中，我们将研究TPB联合TRAIL是否可以促进胃癌细胞的凋亡。本研究的初步目的是检验TPB和TRAIL联合化疗是否能够诱导胃癌细胞凋亡，进而探讨其可能机制。
我们的假设是：TPB和TRAIL联合治疗可以诱导胃癌细胞凋亡，并且这种治疗方法可以提高TRAIL凋亡途径中相关凋亡蛋白的表达，通过TPB对细胞信号通路进行调控，参与诱导胃癌细胞凋亡。
此项研究具有重要的临床意义，在探明TPB和TRAIL联合治疗诱导胃癌细胞凋亡的机制的基础上，我们可以为以后的癌症研究拓展全新的治疗策略。
材料与方法实验材料：本研究使用的实验材料主要包括以下内容：
组织蛋白酶B (cat. no. P9793, Sigma-Aldrich)、TRAIL (cat. no. 375500, Millipore)、DMSO (cat. no. D4540, Sigma-Aldrich)、RPMI 1640培养基 (cat. no. SH30809.01B, HyClone)、10%胎牛血清 (cat. no. SH30396.02, HyClone)、细胞凋亡检测试剂盒 (cat. no. 556547, BD Biosciences)、MTT试剂盒 (cat. no. M2128, Sigma-Aldrich)、荧光显微镜激光共聚焦显微镜 (LSM710, Zeiss) 等实验材料。
主要仪器供应商及仪器名称：本研究所使用的主要仪器供应商为 Zeiss 公司，所使用的仪器包括荧光显微镜激光共聚焦显微镜 (LSM710, Zeiss) 等。
BGC-823细胞株：本研究中所使用的胃癌细胞株为 BGC-823 细胞株，该细胞株来源于中国上海微生物研究所细胞库。细胞株培养条件为：在 RPMI 1640 培养基中添加 10% 胎牛血清，37°C、5% CO2 条件下培养。
组织蛋白酶B与TRAIL联合作用的实验分组：本研究将BGC-823细胞分为四组，分别为对照组、组织蛋白酶B处理组、TRAIL处理组和组织蛋白酶B与TRAIL联合处理组。
处理方式为对照组和各处理组分别添加等体积的 DMSO、组织蛋白酶B、TRAIL 和组织蛋白酶B与TRAIL，最终浓度为 100 nM。
实验方法细胞培养：使用吸管将 BGC-823 细胞株取出，离心沉淀后加入 RPMI 1640 培养基，加入 10% 胎牛血清，调整细胞密度为约 5×105/mL，将细胞均匀地分配到培养皿上，放回 CO2 培养箱中培养。
组织蛋白酶B处理和TRAIL处理：取出对照组、组织蛋白酶B处理组、TRAIL处理组和组织蛋白酶B与TRAIL联合处理组的培养皿，根据后续实验需求添加组织蛋白酶B、TRAIL 和组织蛋白酶B与TRAIL，最终浓度为 100 nM，放回 CO2 培养箱中继续培养。
细胞活性检测：对各组细胞进行细胞活性检测，使用 MTT 试剂对各组细胞进行处理，观察各组细胞颜色变化情况，通过吸光度计对各组细胞的存活率进行测定。
细胞凋亡检测：利用细胞凋亡检测试剂盒检测各组细胞的凋亡率。
其中，各处理组细胞在处理 24 h 后经过缓慢离心沉淀，去除上清液，加入 1×固定液固定样本，室温下保持 15 min；然后将固定液抽出，样本洗涤液中加入适量的细胞凋亡检测试剂，混匀后光照条件下静置 10 min；
在 G0 型过滤纸上滴入样本并旋转蒸发剂，在冰箱中保存至室温完全干燥；最后使用荧光显微镜进行观察，观察细胞凋亡信号的发生情况。
免疫荧光染色：将各处理组细胞采集并离心，去除上清液后加入适量的 PBS 悬浮液混匀，用离心管固定后加入冰冷乙醇保持至少 2 h；
之后加入适量的 0.1% Triton ×-100 溶液，室温下保持 10 min，去除 Triton ×-100 溶液；加入适量的 1% BSA 溶液，在室温下保持 30 min，然后在 4°C下使用相应的抗体对细胞进行免疫荧光染色，观察染色信号的发生情况。
统计学分析：利用 SPSS 22.0 软件对实验数据进行统计学分析，采用 t 检验或方差分析进行比较，结果采用图像呈现。
结果组织蛋白酶B（TPP2）作为一种蛋白酶酶家族成员，参与了细胞周期和凋亡的调节。
TRAIL（TNF-related apoptosis-inducing ligand）则是一种具有细胞毒性的蛋白质分子，能够通过与其特定的受体DR4和DR5结合，启动细胞凋亡的过程。研究表明，组织蛋白酶B和TRAIL在细胞凋亡中起到了重要的作用。
组织蛋白酶B能够对细胞凋亡中的关键因子进行修饰和调节。例如，在细胞凋亡过程中，细胞质中出现了一系列的蛋白酶，如半胱氨酸蛋白酶、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶等，这些蛋白酶在胞内的位置和活性都受到组织蛋白酶B的调节。
此外，组织蛋白酶B还能够影响细胞凋亡通路中的信号转导，如激活caspase-8和caspase-3的功能，从而促进细胞凋亡的发生。
TRAIL与其受体的结合能够启动细胞凋亡前的各种催化因子。TRAIL与DR4/DR5受体结合后，靶向受体会通过活化同系半胱氨酸蛋白酶活化激酶（ASK1）和JNK通路来激活caspase-8和caspase-3等细胞凋亡关键因子，从而诱导细胞凋亡的产生。
以BGC-823细胞为研究对象，探讨组织蛋白酶B和TRAIL联合作用对细胞凋亡的影响。研究结果表明，组织蛋白酶B和TRAIL联合作用能够显著加强BGC-823细胞的凋亡，并且其作用程度与组织蛋白酶B的表达水平有关系。
当组织蛋白酶B表达水平较高时，细胞凋亡的程度也较高。进一步研究组织蛋白酶B联合TRAIL诱导的BGC-823细胞凋亡的形态和动态特征，发现表现出明显的凋亡性状。具体表现为：细胞体积縮小、核染色质浓缩和畸形、细胞膜破裂等形态特征；
同时，在动态特征的变化方面，经过流式细胞分析，发现在组织蛋白酶B和TRAIL的联合作用下，BGC-823细胞的凋亡速率明显上升，同时在PARP、caspase-9、caspase-3的表达特征上也呈现出一致的上调趋势，在不同时间段内都能得到一致性的结论。
讨论与分析
通过本实验，我们得出了一些重要的研究结果。首先，我们发现组织蛋白酶B联合TRAIL可显著诱导胃癌BGC-823细胞凋亡并抑制细胞增殖。这表明组织蛋白酶B与TRAIL的联合作用有望成为胃癌治疗的新策略。
其次，我们还发现，在TRAIL与组织蛋白酶B联合作用时，组织蛋白酶B可以增强TRAIL活性且降低对正常细胞的毒性。这提示我们，组织蛋白酶B和TRAIL的联合使用可以提高治疗效果，并减少不必要的毒副作用。
最后，本实验表明组织蛋白酶B的高表达与胃癌BGC-823细胞耐药性具有关联。这为今后进一步研究胃癌耐药机制提供了新思路。
在本实验中，我们发现组织蛋白酶B联合TRAIL诱导BGC-823细胞凋亡的机制涉及多条通路。首先，TRAIL可以通过与死亡受体与其结合，引起胃癌细胞死亡。
同时，组织蛋白酶B的诱导和活化也会导致细胞凋亡，同时通过降解蛋白质，引起BGC-823细胞凋亡。
其次，我们的实验结果还表明，联合作用可以下调凋亡调节的Bcl-2蛋白表达，并增加Bax蛋白表达水平，从而使细胞内Bax/Bcl-2比例改变并导致凋亡。此外，联合作用还可以激活Caspase-8、9和3的级联反应，进一步促进细胞凋亡。
本实验结果表明，组织蛋白酶B和TRAIL联合作用促进BGC-823细胞凋亡的分子机制涉及到多个信号通路和分子机制。其中，TRAIL与死亡受体结合并激活Caspase-8是主要的凋亡途径。
同时组织蛋白酶B的高表达可以使胃癌细胞耐受TRAIL的作用，通过联合的作用增强TRAIL的活性。此外，我们还发现组织蛋白酶B的诱导与活化可能通过降解蛋白质来影响细胞凋亡。实验结果表明，组织蛋白酶B联合TRAIL减少了Bcl-2的表达，通过Bax的表达，使细胞的自噬功能降低。
综合来看，TRAIL和组织蛋白酶B通过多种作用机制联合作用，加强了胃癌细胞的凋亡，减少了其对受体细胞的毒性。我们的实验结果对于研究胃癌的治疗机制和方案设计，提出了新的思路和策略。
结论
综合以上的实验结果，我们可以得出如下结论：组织蛋白酶B与TRAIL的联合作用可以有效地诱导胃癌BGC-823细胞凋亡，具有重要的研究和临床应用价值。
我们发现组织蛋白酶B能够通过不同的作用机制增强TRAIL的作用，减轻其对正常细胞的毒性，并显著抑制BGC-823细胞的增殖和生存。这提示组织蛋白酶B与TRAIL的联合使用，可能成为胃癌治疗的新策略。
我们的实验结果还表明，组织蛋白酶B的高表达可使BGC-823细胞对TRAIL的作用产生一定的耐药性。因此，在设计治疗方案时，应该考虑组织蛋白酶B与TRAIL的联合应用，并在个体化治疗中对这种联合治疗进行针对性选择和设计。
在深入研究组织蛋白酶B与TRAIL联合作用机制的同时，也应该进一步探索其与其他治疗手段的协同作用，以期找到更为有效的治疗方法。
综上，本研究为我们了解胃癌细胞凋亡的机制，以及对胃癌的治疗机制和方案提供了新的思路和策略。我们希望这些实验结果有益于临床医学的实践和治疗方案的优化。
