1、西班牙与哈布斯堡的第三代男性继承人只有查理五世（1500-1558）与斐迪南一世（1503-1564）兄弟俩。他们的外祖父阿拉贡的斐迪南二世与卡斯蒂利亚的伊莎贝拉一世统一了西班牙，并开启殖民美洲的事业。他们的祖父马克西米利安一世通过联姻将勃艮第、奥地利、西班牙等地整合为欧洲最庞大的家族帝国。
2、兄弟俩的母亲胡安娜是西班牙天主教双王伊莎贝拉一世和斐迪南二世的次女。其兄胡安、姐姐伊莎贝拉和侄子米格尔相继去世后，她于1500年成为西班牙王位的唯一合法继承人。1504年伊莎贝拉一世去世后，胡安娜依法继承卡斯蒂利亚王位，与其夫美男子菲利普成为共治国王，阿拉贡则由胡安娜的父亲斐迪南二世继续统治。
3、1506年菲利普突然病逝，胡安娜因极度悲痛出现精神失常症状。她拒绝埋葬菲利普的遗体，并携带棺材四处巡游，被贵族视为“疯癫”。胡安娜的父亲斐迪南二世趁机以“摄政”名义接管卡斯蒂利亚，但胡安娜仍是法理上的女王。
4、1509年之后，胡安娜被软禁在托德西利亚斯城堡，名义上保留女王头衔，但实际无法理政。摄政的斐迪南二世在阿拉贡推行强化王权的政策，让西班牙尤其是卡斯蒂利亚贵族阶层对中央集权的担忧加剧，迫使西班牙贵族在“混乱的王权”与“外国血统的稳定君主”间选择后者。
5、查理自幼在佛兰德斯长大，受勃艮第-哈布斯堡家族影响，但西班牙贵族看中其两点优势： 其一查理是胡安娜长子，符合卡斯蒂利亚继承法。 其二查理承诺保护贵族特权，并带来尼德兰的财富和哈布斯堡的外交支持，有助于对抗法国和奥斯曼威胁。
6、尽管查理的弟弟斐迪南在西班牙长大，理论上更适应当地文化，但贵族担忧： 其一斐迪南与波西米亚-匈牙利公主安娜·雅盖洛的婚姻，可能将西班牙卷入中欧事务，分散对美洲和地中海的关注。 其二若斐迪南继位，其子马克西米利安可能同时继承西班牙和奥地利，导致西班牙沦为哈布斯堡“次要领土”，损害本土贵族利益。
7、1516年查理抵达西班牙后，贵族宣称胡安娜“永久无行为能力”，迫使她签署文件将王权移交查理。根据西班牙继承法，胡安娜的王位不可剥夺，查理只能以“共治国王”名义统治（称“卡洛斯一世”）。直至胡安娜1555年去世前，查理始终未获得单独统治卡斯蒂利亚的合法名分，但其实际权力早已稳固。
8、1516年，查理在西班牙贵族支持下继承西班牙王位，斐迪南则被排除在外，这成为兄弟矛盾的起点。这样，查理五世继承了来自祖父母和外祖父母的四重遗产。其一是来自外祖母伊莎贝拉一世和外祖父斐迪南二世的西班牙及其美洲殖民地；其二是来自祖父马克西米利安一世的奥地利与神圣罗马帝国；其三是来自祖母玛丽女公爵的勃艮第与低地国家。
9、 这种跨欧洲的分散领土，使得统治极为复杂，尤其是西班牙与德意志事务的冲突。1521年，为解决统治压力，查理五世与弟弟斐迪南达成《布鲁塞尔条约》：查理五世保留西班牙、意大利、尼德兰及海外殖民地，专注于应对法国和地中海事务。
10、斐迪南获得奥地利大公国（包括上奥地利、下奥地利、卡林西亚、卡尼奥拉等）、施蒂里亚、蒂罗尔和施瓦本的部分领地，成为奥地利哈布斯堡分支的统治者。这一分割标志着哈布斯堡家族正式分为西班牙系和奥地利系。
11、1526年奥斯曼帝国在莫哈奇战役中歼灭匈牙利军队，波西米亚和匈牙利国王路易二世阵亡且无子嗣，斐迪南以路易二世姐夫的身份继承王位。斐迪南身兼奥地利大公、波西米亚国王和匈牙利国王，成为中欧最有权势的君主之一，这也把斐迪南推到了与奥斯曼帝国作战的第一线。
12、查理五世虽在1522年按《布鲁塞尔协议》将奥地利交给斐迪南，但却仅没有把尼德兰交给弟弟，连哈布斯堡家族传统的领地也没有在第一时间全交出去，而是留下了蒂罗尔。此举违背了哈布斯堡“领地不可分割”原则。
13、然而，对于查理五世而言尼德兰的财富（尤其是安特卫普的贸易）对西班牙至关重要。因为尼德兰年税收达200万杜卡特（占帝国总收入40%），成为其对抗法国的资金池，而且可以强化西班牙-尼德兰-美洲的经济闭环，但忽视了尼德兰的自治传统，为后来的独立战争埋下伏笔。
14、1531年，查理五世推动选帝侯们选举斐迪南当选“罗马人民的国王”（皇位继承人），表面上是为家族利益，确保帝位不落旁支，诸如虎视眈眈的萨克森选帝侯腓特烈三世等，同时便于处在抵御奥斯曼前线的斐迪南，以调动德意志的各方面资源。加之，查理五世之子腓力（1527年生）年幼，也无法立即接班。
