（5）单孢子分离方法：
1.微操纵器单孢子分离微操纵器是用于利用机器人执行各种微观操作的专用装置。它具有操作方便，快速准确的优点，但价格昂贵。单孢子分离也可以通过自制的简单微操纵器进行。具体方法如下：使用简单的微操纵器时，应使用普通显微镜并排固定，长度为30-40厘米，宽度为25厘米，厚度约为2厘米。用于木板;
安装在微操纵器上的细针是直接工作部件。它通常是通过拉薄玻璃棒制成的。针长4至5厘米，直径0.8至1毫米。端部垂直弯曲，长度为3~4 mm，尖端为锥形，底座用胶粘剂固定在针柄上;针柄适用于长度约20厘米，直径3至4毫米的金属管。在操作期间，针尖垂直向上，并且滑动在针尖上方反转，物体的一侧（可食用的孢子）朝下。为此，需要在舞台上放置框架并竖立载玻片。通常，“”形透明有机玻璃固定在普通载玻片上，称为支架载玻片;有机玻璃框架高度为0.8至1厘米，纵向长度为3至4厘米，外部宽度约为2厘米。表面光滑平整。
用简单的微操纵器分离单晶的步骤如下：在第一步中，将支架载玻片放在载物台上，将载玻片放在载体上，并调节显微镜（使用10-20放大倍数）物镜）观察物体，取下滑块，并保持管位置。
在第二步中，调整玻璃针的位置，使针的尖端位于显微镜视野的中心，然后旋转微调螺旋，直到针的尖端可见。
在第三步中，使用接种铲铲一块约15mm×6mm×1mm的2％水琼脂块并将其置于载玻片的中间。另外，铲3至5毫米方形琼脂块并用它来粘贴它。将少量食用菌孢子，然后用载玻片上琼脂块的中间表面轻轻接触孢子染色的一侧，并将孢子转移到载玻片上。
在第四步中，将孢子涂覆的载玻片倒置在载体上，调节显微镜和显微操纵器以同时观察孢子和尖端;移动推动器，使尖端对齐以分散各个孢子，并且向上缓慢调节操作者。 ，使针的尖端慢慢接近单个孢子，直到它被针尖周围的水膜吸收。
在第五步中，操作推动器以使滑动件相对于针尖移动，并且用针尖将孢子移动到预定位置，降低针尖，从琼脂移除针在表面上，将孢子置于预定位置，并用针尖将孢子转移到小琼脂上。块和主体块之间的连接用线标记。这样做直到每个预定位置移动到单个孢子中。
在第六步中，快速除去具有单个孢子的载玻片，并在无菌条件下，将具有单孢子的小琼脂片转移到培养基平板上，并在合适的温度下培养几片平板;在低放大倍数下观察孢子萌发和菌落生长约2天，并且发现发芽的菌落立即转移到空白培养基中以获得单孢子的纯培养菌丝。该操作需要相应的仪器，这需要高精度，但由于经济实用性和操作困难，它不适用于专业合作社和散户投资者等一般小企业。
2.平板稀释法：在无菌水中取少许孢子，摇匀，制成孢子悬浮液，然后在PDA培养基平板上吸1或2滴孢子溶液，用无菌玻璃刮刀均匀涂抹液滴孢子分散并在合适的温度下培养。几天后，观察孢子萌发，将其标记在单个孢子旁边，继续培养，然后将其捡起并捡起并转移到PDA培养基试管中。大约一周后，当菌丝体长到约1cm时，进行显微镜检查以确定它是否是单核菌丝（没有锁状组合的双核菌丝）。
3.连续稀释法：预先准备一管含有10毫升无菌水的试管，几管含9毫升无菌水，取几片孢子，放入10毫升无菌水中摇匀，分散孢子。均质化后，取出1ml孢子溶液并将其放入9ml无菌水中，然后操作直至在低放大倍数下检查一个视野中的一个或两个孢子，然后用无菌注射器在最后一次稀释中移液。孢子溶液，滴在斜面培养基上或滴在平板上，均匀涂抹，每管1至2滴，使孢子液缓慢流下并在合适的温度下培养。观察孢子萌发。当发现单个菌落时，立即将其转移到空白培养基中，继续培养，并进行实时显微镜检查。
4.毛细管法：用玻璃移液管吸取稀释的孢子悬浮液，滴入无菌培养皿的盖子内，标记斑点，并在样品仍然覆盖琼脂培养基底部后放置培养皿。在盘子上。在显微镜检查之后，确定液滴是单个孢子，并且将一小块介质放置在单个液滴旁边，并轻轻推动以接触液滴。注意不要覆盖水滴，以免影响孢子萌发。在菌丝体在培养基上生长后，将其转移到空白培养基中并在合适的温度下培养以获得单核菌丝。四，菌株的自然保存：
该菌株在一段时间内或一段时间内不使用。为了保持菌株的基本特征和活性，有必要采取一定的措施来储存它，将其代谢降低到最低水平，保持其活力，并在短时间内使用。通常，短期自然保存放在普通的民用冰箱中，温度可以调节到2到4℃，并且可以在短时间内储存2到3个月。该方法适用于产量较大或较早引入农场的企业或散户投资者。 5.菌株锯末：
（木块）保存这种方法适用于偏远地区，或者当电源不正常，或者携带不方便，或者情况比较特殊，不能携带试管应变等，应变可以连接小木块或锯末，细菌完成后，木块可直接放在室温下。使用时，可以通过分割木块进行基质分离来获得纯木材种类。 6.细菌菌株的储存：
它是一种常规的短期储存，冰箱可以调节到2到4°C。注意事项：不要使用活冰箱以避免污染。 7.菌株的尿素储存：
注意事项：务必打包细菌层以避免异味。 8.菌株的深度保存一旦深井保存菌株受到人们的高度评价，基本的做法是使用原始井和利用率低的干井，并参照尿素保存方法包装菌株。在容器内，将其挂在深井表面，不要接触水，因此在两三个月内，菌株可以保持其初始外观，并且由于自然条件无毒无害，因此应变不会受到不利影响。 。例如，也可以使用储存生姜的鲁中和东部地区的“生姜井”，鲁东和“地瓜井”区域，并且可以获得相同的效果。九，保护物种的坑这种类型的设施，包括天然坑洼和防空洞，隧道，军事隧道等，使用与深井保存相同的效果，不再重复它们。
