测线粒体膜电位真的很简单，分享一下经验

任兴趣学 任性去学 游学团 膜电位是常见的线粒体功能检测指标，之前也总结过所有的线粒体功能实验，可以🔍去看哦 常见的测膜电位的试剂：TMRM，TMRE，JC-1 TMRM和TMRE类似，阳离子荧光染料 [向右R]在正常细胞中进入线粒体基质发出红色荧光（肉眼看会有些桔红色） [向右R]当细胞受损（例如凋亡）线粒体膜电位下降，细胞内荧光消失 [向右R]也就是膜电位下降，视野内红色荧光减少！ [向右R]JC-1也属于阳离子荧光染料，正常细胞内发出红色荧光，线粒体受损时膜电位下降或丧失，JC-1只能以单体的形式存在于胞浆中，发出绿色荧光 [向右R]也就是膜电位下降：视野内会出现绿色荧光！ 个人比较喜欢用的是TMRE（如图），做实验的感受基本是膜电位丧失（红色荧光消失），很少见到膜电位下降的情况（红色荧光减弱）❗️ 可以用荧光显微镜拍摄，也可染色后做流式分析～因为本人要merge白光视野中的细胞图（mark一下死细胞膜电位丧失这一点），所以采用🔬拍摄，可视化强一点，很直观 图上可以明显看到发生焦亡的细胞，红色荧光消失 染色方法： 1、TMRE 配制成1*工作液（一般试剂都会自带缓冲液配制工作液），6孔板可以配置1ml备用 2、悬浮细胞取50～100万，密度刚好，离心，用1ml工作液重悬放到6孔板中 3、37度培养箱孵育15～45min，我一般孵育20min，孵育太久容易背景高 4、到时间后，拿出细胞到荧光显微镜下检查是否染上（注意避光），如果染上了就可以去洗细胞，用pbs洗 ⚠️注意1：贴壁细胞弃掉上清，用pbs轻轻润洗即可，悬浮细胞离心然后pbs轻柔重悬洗一次，可以用600g*5min去离心 ⚠️注意2： 如果用TMRE或者TMRM染色，必须拍和细胞的merge图，这样才能证明膜电位下降，否则只有荧光图无法证明 如果用JC-1染色，merge不是必须的，因为出现绿色荧光即代表膜电位下降or丧失 ⚠️注意3： 拍摄merge图，本人是不洗细胞的（尤其悬浮，不要洗），因为洗细胞会丢失很多受损的细胞，会降低阳性率，染色完以后，直接拿去荧光显微镜拍摄即可❗️🔬 染色只要不要太久，背景不高，不用担心背景问题 科研日常 细胞实验 研究生 研究生日常 科研 线粒体膜电位 科研学习