在细胞培养精密 “舞台” 上,血清是滋养细胞茁壮成长的 “琼浆”,但其中自带的外泌体却常如 “不速之客”,干扰科研人员对目标细胞分泌外泌体特性、功能的精准洞察。故而,巧妙去除血清来源外泌体,成了细胞培养关键 “工序”。
超滤,堪称精细 “筛网” 过滤法。恰似用特制 “滤网” 拦截杂质,借助超滤膜不同孔径,依外泌体大小(直径约 30 - 150 纳米)精准筛选。操作时,先将含血清培养液置入超滤装置,在压力驱动下,小分子营养物、离子等穿膜而过,外泌体等大分子则被截留。多次循环超滤,逐步降低外泌体 “浓度”,净化血清。不过,这过程得把控好压力、流速,谨防蛋白聚集堵塞膜孔,影响过滤效率与血清品质。
超速离心是 “强力分离” 手段。依托高速旋转产生强大离心力,依物质密度差异 “分道扬镳”。把血清样本放进超速离心机专用离心管,设定高转速(常超 100,000 转 / 分钟)长时间运转,密度大的细胞碎片等先沉降,外泌体随后沉淀于管底,小心吸取上层清液即得外泌体贫化血清。但它对设备要求严苛,耗时久、成本高,且操作稍有差池,易致各分层混淆,前功尽弃。
还有基于免疫亲和原理的 “精准捕获” 策略。利用外泌体表面标志性蛋白(像 CD9、CD63 等),制备对应抗体并固定在固相载体(如磁珠、琼脂糖凝胶)上,制成 “外泌体捕手”。当血清流经,外泌体与抗体特异性结合被吸附,其余成分畅行,实现分离。优势在于特异性强、纯度高,可精准 “揪出” 外泌体;缺点是抗体成本不菲,制备流程复杂,需严格控制反应条件保效果。
在科研征途上,每种去除法各有优劣,需依实验目的、条件权衡抉择。从超滤的简便初筛,到超速离心 “大力提纯”,再到免疫亲和 “精确定位”,科研人员多管齐下、灵活运用,只为给细胞营造纯净 “生长天地”,解锁细胞外泌体的神秘密码,推动生命科学研究破浪前行。