在无菌检测中，设置阳性对照的目的是验证检测方法的有效性和可靠性，确保在有菌存在的情况下能够检测出阳性结果。以下是设置阳性对照的一般步骤和方法：

1.选择对照菌

通常根据检测的样品类型和检测目的，选择具有代表性的阳性对照菌株。例如，对于一般的药品无菌检测，可选择金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌和黑曲霉等。

2.制备对照菌液

将选择的对照菌接种到适宜的培养基中进行培养，使其生长到一定的浓度。然后，使用生理盐水或其他适宜的稀释液将对照菌制成一定浓度的菌悬液。菌悬液的浓度应根据检测方法和要求进行确定，一般在 10⁻¹ - 10⁻³ cfu/ml 范围内。

3.接种阳性对照

按照与样品检测相同的操作方法和条件，将一定量的对照菌液接种到检测系统中。例如，如果采用薄膜过滤法进行无菌检测，将对照菌液加入到过滤器中，然后按照正常的过滤、冲洗、培养等步骤进行操作;如果采用直接接种法，将对照菌液直接接种到培养基中进行培养。

集菌仪

4.培养和观察

将接种了阳性对照的培养基或检测系统放入适宜的培养条件下进行培养，培养时间和温度应与样品检测相同。在培养过程中，定期观察对照培养基或检测系统中是否有菌落生长或其他阳性反应。

5.结果判断

如果在阳性对照中观察到了相应对照菌的生长或阳性反应，说明检测方法有效，检测结果可靠;如果阳性对照未出现阳性结果，则需要对检测方法、操作过程、培养基质量等进行检查和分析，找出问题所在，并重新进行检测。

集菌仪

需要注意的是，在进行阳性对照实验时，应严格遵守无菌操作原则，防止对照菌液受到污染或交叉污染，同时要确保对照菌液的质量和浓度准确可靠。以下给您举一些例子：

例 1：在药品无菌检测中，使用薄膜过滤法。取 1ml 浓度为 100 cfu/ml 的金黄色葡萄球菌菌悬液加入到过滤器中，过滤后用冲洗液冲洗，然后将滤膜取出，贴在相应的培养基平板上，置于 30 - 35℃培养箱中培养 3 - 5 天，观察平板上是否有金黄色葡萄球菌菌落生长。

例 2：对于医疗器械的无菌检测，采用直接接种法。将 0.1ml 浓度为 50 cfu/ml 的大肠埃希菌菌悬液接种到 10ml 硫乙醇酸盐流体培养基中，同时将另一份 0.1ml 菌悬液接种到 10ml 胰酪大豆胨液体培养基中，分别置于 30 - 35℃和 20 - 25℃培养箱中培养 14 天，观察培养基中是否有大肠埃希菌生长及浑浊等现象。