人正常食管上皮细胞（HNEpC）在细胞生物学研究中具有重要意义。以下是一份 HNEpC 细胞培养攻略，助力您成功培养该细胞。

一、细胞复苏

准备工作：提前将恒温水浴锅预热至 37°C，在超净工作台中准备好含适量完全培养基（如含 10% 胎牛血清、1% 青霉素 - 链霉素的特定基础培养基）的培养皿或培养瓶，并预热。

解冻：从液氮中取出冻存的 HNEpC 细胞管，迅速放入 37°C 水浴锅中，快速晃动使其在 1 - 2 分钟内完全解冻。

接种：将解冻后的细胞悬液缓慢转移至预装有培养基的培养容器中，轻轻混匀，使细胞均匀分布，然后置于 37°C、5% CO₂培养箱中培养。

二、细胞传代

观察：当细胞融合度达到 70% - 80% 左右时，可进行传代。先在显微镜下观察细胞形态和生长状态，确保细胞健康。

吸弃培养基：轻轻吸弃旧培养基，用无菌磷酸盐缓冲液（PBS）轻轻冲洗细胞 2 - 3 遍，以去除残留的血清和死细胞。

消化：加入适量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液，覆盖细胞表面，在显微镜下观察，当细胞变圆、开始脱落时，立即加入含血清的培养基终止消化。

吹散和接种：用移液器轻轻吹打细胞，使其形成均匀的单细胞悬液，按照合适的比例接种到新的培养容器中，补充新鲜培养基，放回培养箱继续培养。

三、细胞培养条件

温度：维持在 37°C，温度过高或过低都会影响细胞生长速率和活性。

CO₂浓度：保持 5% 的 CO₂浓度，以维持培养基的 pH 值稳定。可使用 CO₂培养箱，并定期校准其 CO₂浓度和温度。

湿度：培养箱内相对湿度一般控制在 95% 左右，可防止培养基蒸发过快导致渗透压改变。

四、注意事项

严格无菌操作：在细胞培养的全过程中，包括操作工具、培养基、培养容器等都要保证无菌，避免细菌、真菌或支原体污染。

定期观察：每天观察细胞生长情况，如细胞密度、形态、是否有污染迹象等，及时处理异常情况。

培养基更换：根据细胞生长速度，一般每 2 - 3 天更换一次培养基，为细胞提供充足的营养物质并维持良好的生长环境。

遵循以上攻略，能够为 HNEpC 细胞提供适宜的生长条件，确保细胞培养的成功，为相关研究提供稳定可靠的细胞来源。