WB实验|样本提取以及选购研磨仪

啊研有话说 2024-09-27 13:51:41

WB实验介绍

“Western Blot

WB(Western Blot,蛋白免疫印迹)是一种常规的蛋白分析技术,常用于鉴定某种蛋白,并能对蛋白进行定性和半定量分析。

WB实验的基本核心理念是抗原抗体的特异性反应,通过变性胶 SDS-PAGE 将不同分子量的蛋白质分离开,然后转移到固相载体 PVDF 膜上,再用脱脂牛奶作为封闭液进行封闭和一抗稀释液进行稀释。待目的蛋白和抗体充分结合后,用 TBST 洗脱液洗脱掉多余未结合的一抗,加入带有 HRP 标记的对应二抗,这样,我们的蛋白+一抗+二抗形成一个复合物,加以化学发光液,有靶蛋白的位置就会产生荧光,利用胶片或者化学发光仪就可以显现靶蛋白的条带显现。

WB常规实验流程:蛋白提取→蛋白定量→制胶→电泳→转膜→封闭→一抗孵育→一抗洗脱→二抗孵育→二抗洗脱→化学发光→数据分析。

今天我们介绍的是第一步样品的提取以及如何选购合适的研磨仪:

组织总蛋白提取

准备好所需要数量的样本管;放入研磨珠,置于冰盒上备用;

组织块先用预冷 PBS(SRB003)洗涤 2-3 次,除去血污,然后放在滤纸上,吸尽多余的 PBS 后放入对应的匀浆管中,加入大约 10 倍样本体积的完全裂解液,置于组织研磨仪中,对称放置,确认放置平衡后,盖好盖子,选择程序开始匀浆。

选择研磨仪的考虑因素:

实验目的:首先,要明确WB实验的目的,是需要对整个组织或细胞进行研磨,还是只需要研磨特定的细胞亚群或细胞器。这直接影响着研磨仪的选择。

样本性质:样本的硬度、大小和数量都会影响研磨仪的选择。对于柔软的组织,可以选择具有较大研磨珠的研磨仪,以便更充分地研磨;对于硬质组织,则需要选择具有较小研磨珠的研磨仪,以避免对样品造成过度研。

实验精度:根据实验所需的精度要求,可以选择不同型号的研磨仪。高精度的研磨仪可以获得更均一、更细小的颗粒,但同时也会增加实验时间和成本。

设备功率:根据样本的性质和实验需求,选择具有适当功率的研磨仪,以确保研磨效果和实验效率。

设备大小:根据实验样本的数量和研磨需求,选择适当的设备大小。较大的设备可以同时处理多个样本,提高实验效率,但也会占用更多的实验空间。

WB实验第一期就到这里啦,还有更多步骤会在后续推文中讲解,敬请关注!

0 阅读:0