你也在做ELISA嘛？

关于ELISA实验，你需要了解的都在这里~

酶联免疫吸附测定法 (enzyme-linked immunosorbent assay)，简称 ELISA，是用于检测微量物质的固相免疫测定方法，是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种免疫酶技术。自1971年问世以来，发展十分迅速，已成为是免疫学和分子生物学中广泛使用的实验室技术。

01

检测原理

将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，用酶标记抗原或抗体孵育，使抗原抗体在固相表面结合，通过加底物发光显色检测液体中未知抗体或抗原的方法。

RayBiotech ELISA试剂盒检测原理示意图

特点：

高度特异性：保持抗原抗体反应的特异性

高灵敏度：酶催化底物显色的高效性，pg水平微量检测

定性定量检测：反应液颜色深浅或光密度值

02

ELISA类型

在具体的实验中，由于的不同反应物具有不同的特性，具体的检测方法也有很多种。例如：直接法、间接法、夹心法、竞争法、捕获法等。

直接法：

将抗原固定在载体上，然后加入酶标记的一级抗体，即可测定抗原总量，该方法操作简便，无需二抗可避免交叉反应，缺点是费用较高，并且无法检测抗体数量。

间接法：

将抗原固定与载体上，采用抗原连接被检测抗体，再连接酶标抗体的方式进行检测，虽然可以做不同的检测分析，但该方法只能抗体的测定，并且容易发生交叉反应。

双抗体夹心法：

该方法中抗原被捕捉抗体和酶标抗体结合与不同位点，捕捉抗体固定于载体上，酶标抗体通过结合抗原进行测定，该方法中使用的抗体需为单抗，并且与抗原有不同的结合位点，如此才可避免交叉反应和竞争性反应。因此夹心发具有高灵敏度，高专一性的特点，但只适合有多个结合位点的抗原。

双抗原夹心法：

该方法中将抗原固定于载体，检测样本中的抗体与抗原结合后，需要使用酶标抗原进行后续的结合，可以用来检测样本中的抗体。双抗原夹心法的关键在于酶标抗原的制备。

03

ELISA检测的实验步骤

其实，不管是哪一种ELISA,它的操作都由以下几种基本的操作组合而成:

首先，将抗原或抗体吸附到固相载体上;加入待检样品以及后续试剂;温育;洗涤去掉游离未结合的反应物;加入酶检测底物以及最后的结果的判读。

选择一个质量好，稳定性高的ELISA试剂盒，是实验成功的一半！

云克隆（Clond-Clone Corp） ELISA试剂盒武汉云克隆科技股份有限公司是以分子生物学与免疫学研究和实验发展为主的高新技术企业集团。

云克隆凭借着深厚的技术积累和庞大的引物、cDNA、质粒、杂交瘤细胞“种子库”和检测试剂半成品库库存，能够做到约11,000种蛋白、19,000种抗体以及7,000种检测试剂盒立等可取。其中蛋白产品包括天然蛋白、重组蛋白、合成多肽和小分子偶联蛋白。抗体产品包括单克隆抗体与多克隆抗体，部分抗体采用HRP、FITC或生物素标记成为标记抗体。制剂中心负责检测试剂盒的研制，主要是ELISA和CLIA试剂盒。检测中心负责所有蛋白、抗体以及检测试剂盒产品的检测及质量控制，实行三级质量控制，包括原料检测、半成品检测及成品检测。

更多生物科技资讯和实验技巧，请留意公众号广州专研生物科技有限公司