在细胞生物学研究领域，准确测定细胞活力至关重要。MTT 比色法作为一种经典且广泛应用的方法，为科研人员提供了便捷有效的检测手段。
MTT，即 3-(4,5 - 二甲基噻唑 - 2)-2,5 - 二苯基四氮唑溴盐，它可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成不溶于水的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan），而死细胞此酶活性丧失，无法将 MTT 还原。
实验前准备是关键。首先要培养状态良好的细胞，以对数生长期为宜，确保细胞具有稳定的代谢活性。同时准备好洁净的 96 孔细胞培养板、MTT 溶液、二甲基亚砜（DMSO）等试剂，所有器材需严格无菌处理。
操作步骤如下：将处于合适密度的细胞悬液，按一定体积均匀接种到 96 孔板中，一般每孔 100-200μL，使细胞均匀分散，边缘孔用无菌 PBS 填充以减少边缘效应。将接种好的细胞放入培养箱，在适宜的温度、湿度及二氧化碳浓度下培养一定时间，让细胞贴壁生长。达到设定时间后，取出培养板，小心吸去旧培养液，每孔加入适量配置好的 MTT 溶液，轻轻振荡混匀，再次放回培养箱孵育。这期间活细胞内的酶会将 MTT 逐步还原。孵育结束后，小心吸弃孔内上清液，注意不要扰动底部沉淀，每孔加入 DMSO 溶解甲瓒结晶，振荡使结晶充分溶解，待溶液颜色均匀后，使用酶标仪在特定波长（通常 570nm 左右）下测定各孔吸光度值。
结果分析时，通过对比实验组与对照组的吸光度数值，利用公式计算细胞活力。一般来说，吸光度值越高，代表细胞活力越强。同时，为确保结果准确性，实验应设置多复孔，减少误差，还需设立空白对照以校准背景值。
MTT 比色法凭借其操作相对简便、成本较低、重复性好等优势，在细胞活力测定中站稳脚跟，但它也有一定局限性，如对细胞有一定毒性、不适用于悬浮细胞等。科研人员需依据研究需求灵活选用，为细胞相关研究提供精准数据支撑。
