在细胞培养的过程中，支原体污染是一个常见且棘手的问题。支原体是一类极其微小的微生物，它们能够在不知不觉中潜入细胞培养体系，对细胞的生长、形态和功能等方面产生诸多不良影响。因此，准确鉴别细胞是否被支原体污染至关重要。

一、观察细胞形态变化

当细胞遭受支原体污染时，其形态往往会发生一些微妙的改变。正常的细胞通常具有清晰的轮廓、规则的形状和均匀的生长状态。然而，被支原体污染后的细胞可能会出现以下形态变化：

细胞体积增大或缩小：支原体的寄生可能影响细胞的正常代谢和渗透压调节，导致细胞体积异常。例如，一些细胞可能会变得肿胀，边缘模糊不清；而另一些细胞则可能萎缩变小。

细胞形态不规则：原本应该呈多边形或梭形等典型形态的细胞，可能会变得扭曲、变形，失去其正常的几何形状。

细胞质颗粒增多：支原体感染可能引发细胞内代谢紊乱，导致细胞质中出现较多的颗粒状物质，使细胞质看起来不再清澈透明。

二、检测细胞生长速度和活力变化

支原体污染对细胞的生长速度和活力有着显著影响：

生长速度异常：健康细胞在适宜的培养条件下具有相对稳定的生长速度。但被支原体污染后，细胞的生长速度可能会明显加快或减慢。例如，一些支原体可能会为细胞提供额外的生长因子，促使细胞过度增殖；而另一些支原体则可能干扰细胞的正常代谢途径，抑制细胞生长。

活力下降：通过细胞活性检测方法，如台盼蓝染色法，可以观察到被支原体污染的细胞活力降低。正常细胞能够排斥台盼蓝染料，而活力较差的细胞则会被染成蓝色。在支原体污染的情况下，细胞对染料的排斥能力减弱，被染色的细胞比例增加。

三、运用微生物学检测方法

培养法这是一种传统的检测支原体的方法。将细胞培养上清液接种到适宜的支原体培养基中，在特定的温度和气体环境下进行培养。如果培养基中出现支原体特有的菌落形态，如 “煎蛋样” 菌落，则可以初步判断细胞被支原体污染。然而，这种方法培养周期较长，通常需要数天甚至数周的时间，且灵敏度相对较低。

DNA 荧光染色法采用特定的荧光染料，如 Hoechst 33258 等，这些染料能够与支原体的 DNA 特异性结合。将细胞进行染色处理后，在荧光显微镜下观察。如果发现细胞周围或内部存在着点状或丝状的荧光信号，就提示可能存在支原体污染。这种方法相对快速、灵敏，但也可能会出现假阳性结果，需要结合其他方法进行验证。

PCR 检测法聚合酶链式反应（PCR）技术是一种高效的检测手段。通过设计针对支原体特异性基因序列的引物，对细胞样本中的 DNA 进行扩增。如果扩增出了与支原体相关的基因片段，就可以确定存在支原体污染。PCR 检测法具有极高的灵敏度和特异性，能够在短时间内检测出微量的支原体，但需要专业的设备和技术人员操作。

四、间接检测方法

检测细胞代谢产物支原体的代谢活动可能会影响细胞培养体系中某些代谢产物的含量。例如，支原体可能会消耗培养基中的葡萄糖、氨基酸等营养物质，导致其含量下降速度加快。同时，支原体还可能产生一些特殊的代谢产物，如乳酸、氨等，使培养基的酸碱度发生变化。通过定期检测培养基中这些物质的含量和酸碱度变化，可以间接推断细胞是否被支原体污染。

观察细胞培养物的过滤性支原体的体积非常小，能够通过一般的细菌过滤器。将细胞培养上清液通过孔径为 0.22 微米的过滤器，如果滤液仍然能够在新的细胞培养体系中引起类似的污染症状，那么就高度怀疑是支原体污染。

总之，鉴别细胞是否被支原体污染需要综合运用多种方法，从细胞形态、生长特性、微生物学检测以及间接检测等多个角度进行观察和分析。在细胞培养过程中，定期进行支原体检测是非常必要的，以便能够及时发现并处理污染问题，确保细胞培养的质量和实验结果的可靠性。