上海富衡|培养液现絮状物，细胞“安危”如何定？

在细胞培养这个精细活儿里，培养液里突然出现絮状物，这可太让人头疼了。大家肯定都心急如焚，想赶紧弄清楚这絮状物到底是何方神圣，会不会对细胞的生长、增殖还有实验结果产生影响 。今天咱就来好好唠唠，该怎么确认培养液里的絮状物有没有影响细胞。这对咱细胞培养的 “大业” 可太关键了，关乎实验能不能顺顺利利进行，数据是不是准确可靠。

先瞅瞅培养液的浑浊度。正常情况下，培养液就跟纯净水一样，清澈透明 。要是变得浑浊了，很可能是细菌在里头大量繁殖。像大肠杆菌污染，不出 1-2 天，培养液就能浑浊得像杯浑水。

培养基的颜色也是关键线索。多数培养液里都有酚红这种 pH 指示剂，细胞正常代谢的时候，pH 值会有点变化，颜色也跟着变一变。但要是颜色变得特别奇怪，那就得警惕了。比如说，真菌污染时，代谢产物可能会让培养液颜色变深，甚至发黑。

还有，得留意培养液里有没有漂浮物或者沉淀物。要是有白色、黑色或者其他颜色的丝状、絮状漂浮物，很有可能是真菌来捣乱了。而一些细菌污染呢，可能会在培养液底部产生颗粒状的沉淀物，像葡萄球菌污染，就会在底部出现白色沉淀小颗粒。

培养瓶的内表面也不能放过。要是出现了菌斑、霉斑，那大概率是真菌污染。而且不同真菌污染，菌斑的颜色、形状都不太一样 。黑曲霉污染，瓶壁上能看到黑色菌斑，还会随着时间慢慢变大；要是白色念珠菌污染，菌斑可能就是白色的，形状不规则。所以，仔细观察培养瓶表面，对判断絮状物是不是真菌引起的，很有帮助。

低倍镜就像是细胞世界的 “广角镜头”，能让我们快速看到细胞的整体情况。先看细胞形态和密度，正常的细胞都有自己独特的 “长相”，比如成纤维细胞是梭形的，上皮细胞像铺路石一样规则排列 。要是细胞形态变得歪七扭八、肿胀，甚至破裂，或者细胞密度突然降低（排除正常细胞凋亡这些情况），那就很可能是被污染了。像细菌污染时，产生的毒素会让细胞 “受伤” 破裂，在视野里能看到好多细胞碎片。

再留意有没有运动的微生物。细菌和一些原生动物要是来捣乱，在低倍镜下能看到它们像小颗粒一样动来动去。细菌一般是小小的、快速移动的颗粒状，运动方式各种各样，有的直线跑，有的像喝醉了一样做布朗运动。比如假单胞菌，在视野里游动速度很快，特别容易被发现。

高倍镜则是 “特写镜头”，能让我们把微生物的细节看得清清楚楚。在高倍镜下，细菌的形态一目了然，有圆溜溜的球菌，像一串串葡萄的金黄色葡萄球菌就是典型；有直直的杆菌，大肠杆菌就长这样；还有像弹簧一样的螺旋菌。通过这些形态，能初步判断是哪种细菌在搞破坏。

要是真菌污染，菌丝和孢子就像隐藏在细胞里的 “小怪物”，菌丝是粗细不均、有分支的丝状结构，孢子则是圆形或者椭圆形。青霉菌污染时，菌丝像扫帚一样分支，还有绿色的孢子，特别显眼。

支原体比细菌小得多，在普通光学显微镜下很难看清，但在高倍镜下，要是仔细观察，有时能看到类似油煎蛋样的结构，这就是支原体在细胞表面生长形成的典型形态。不过，发现支原体得有一定经验，还得瞪大眼睛仔细瞧 。

正常细胞的生长就像有个 “生物钟”，按照潜伏期、对数生长期、平台期这样的节奏来。要是细胞生长速度明显变慢，甚至干脆停止生长了，排除掉营养不够、温度不合适这些培养条件的问题，那污染的可能性就很大。

支原体污染就是让细胞生长速度 “变慢” 的一大 “元凶”。支原体特别 “狡猾”，悄咪咪地消耗细胞培养基里的营养成分，还干扰细胞正常代谢。有研究表明，被支原体污染的细胞，生长速度能降低 50% 甚至更多 。原本 3 天就能长满一瓶的细胞，受污染后可能得 7 - 10 天才能长满，这对实验进度的影响可太大了。

检测细胞培养上清液里代谢产物的含量变化，也是判断细胞有没有受污染的好办法。乳酸脱氢酶（LDH）就是个很重要的 “指标”。LDH 原本在细胞里面待得好好的，当细胞受到污染，细胞膜被破坏，它就会跑到培养基里，导致上清液中 LDH 的含量升高。

比如说，细胞被细菌污染后，细菌产生的毒素会损伤细胞，使细胞膜通透性增加，LDH 释放到培养基中。通过检测 LDH 含量，和正常细胞培养上清液对比，要是含量明显升高，那就很可能是细胞受到污染了。而且，LDH 含量升高的程度，还能在一定程度上反映细胞受损伤的严重程度 。

支原体这小家伙，个头超小，在普通显微镜下基本看不到，想要精准检测，还得靠专业的支原体检测试剂盒。市场上常见的有基于 PCR 技术和荧光染色原理的试剂盒。

基于 PCR 技术的支原体检测试剂盒，简直就是支原体 DNA 的 “放大镜”。它能通过设计特定的引物，把支原体的 DNA 片段不断扩增。只要样本里有支原体，哪怕数量极少，经过多轮扩增，也能被轻松检测出来。就像在大海里找一根针，PCR 技术能把这根针变得超级大，一下子就能发现。而且，这种试剂盒的灵敏度和特异性超高，能精准识别支原体，很少出现误判的情况。

还有基于荧光染色原理的试剂盒，也是检测支原体的一把好手。它利用一种特殊的荧光染料，这种染料能和支原体的 DNA 紧密结合。在荧光显微镜下，被染色的支原体就像黑暗中的星星，发出明亮的荧光，特别容易辨认。操作的时候，先把细胞固定好，然后用染料染色，最后在显微镜下观察，要是看到细胞周围有许多大小均一的荧光小点，那就说明支原体 “光顾” 了 。

细菌和真菌检测试剂盒的原理，主要是基于抗原 - 抗体反应或者对微生物特定代谢产物的检测。基于抗原 - 抗体反应的试剂盒，就像给细菌和真菌准备了一把 “专属钥匙”。试剂盒里的抗体，能精准地和细菌、真菌表面的抗原结合，一旦结合成功，就会产生明显的反应，告诉我们有细菌或真菌存在。

基于微生物特定代谢产物检测的试剂盒，则是通过检测细菌、真菌在生长过程中产生的特殊物质来判断。比如，有些细菌会产生特定的酶，有些真菌会分泌特殊的毒素，试剂盒就是抓住这些 “蛛丝马迹”，快速判断有没有污染。而且，这类试剂盒操作简单，出结果速度快，一般几个小时就能知道答案，大大缩短了等待时间，让我们能尽快采取措施 。

确认培养液内絮状物对细胞是否有影响，得从肉眼观察、显微镜检测、分析细胞生长状态和借助检测试剂盒等多方面入手。要是确定絮状物对细胞有影响，那就得赶紧更换培养基，把培养器具好好消毒，避免污染进一步扩散。要是细胞已经被严重污染，无法挽救，那就只能舍弃，重新开始培养了。及时判断絮状物的影响，能让我们的细胞培养实验少走弯路，保证实验结果准确可靠 。