上海富衡|HNEpC细胞培养攻略

小衡衡 2024-10-29 10:04:53

HNEpC 细胞(人鼻黏膜上皮细胞)的培养对于研究鼻腔相关的生理功能、疾病机制以及药物研发等具有重要意义。以下是一份详细的 HNEpC 细胞培养攻略。

一、培养前准备

细胞来源与质量检测确保获取可靠来源的 HNEpC 细胞,可从正规的细胞库或经过验证的实验室获取。在收到细胞后,应立即进行细胞活力检测,如台盼蓝拒染法,以评估细胞的初始状态和存活率。一般来说,活细胞不会被台盼蓝染色,而死细胞会被染成蓝色。细胞存活率应在较高水平(通常 80% 以上)为宜,以保证后续培养的顺利进行。

培养器材与试剂准备准备合适的培养容器,如培养瓶或培养皿,需确保其无菌。常用的培养瓶规格有 25cm²、75cm² 等,可根据细胞培养的数量和实验需求选择。准备细胞培养基,HNEpC 细胞通常需要特定的上皮细胞培养基,其中可能包含多种营养成分,如必需氨基酸、维生素、无机盐等,以及一些生长因子如表皮生长因子(EGF)等,以支持细胞的生长和分化。此外,还需准备胎牛血清,一般血清添加比例为 5% - 10%,胎牛血清能为细胞提供丰富的营养和生长因子,但使用前需进行热灭活处理,以去除可能存在的补体等对细胞有影响的成分。同时,准备好胰蛋白酶或其他合适的消化酶,用于细胞的传代培养。还需准备无菌的 PBS 缓冲液,用于清洗细胞。

二、细胞培养操作

细胞接种将培养瓶或培养皿在超净工作台中用紫外线照射消毒 30 分钟左右。从液氮罐或细胞库中取出 HNEpC 细胞,迅速放入 37℃水浴锅中解冻,解冻过程要轻柔摇晃,使其尽快解冻但避免细胞受损。解冻后的细胞悬液用培养基稀释后,以适当的细胞密度接种到培养容器中。例如,对于一个 25cm² 的培养瓶,初始接种细胞数量可为 5×10⁴ - 1×10⁵个。接种后,将培养瓶轻轻摇晃,使细胞均匀分布,然后放置在 37℃、5% CO₂的培养箱中培养。

培养条件维持细胞培养箱的温度应严格控制在 37℃,温度波动过大可能影响细胞的生长和代谢。CO₂浓度保持在 5%,CO₂主要用于调节培养基的 pH 值,使其维持在细胞生长适宜的范围内。定期检查培养箱的水盘,确保有足够的无菌水,以保持培养箱内的湿度。每天观察细胞的生长状态,可通过显微镜观察细胞的形态、密度等。HNEpC 细胞在正常生长情况下,应呈现出上皮细胞特有的形态,如多边形等,细胞之间连接紧密。当细胞密度达到 80% - 90% 左右时,需进行传代培养。

细胞传代当细胞需要传代时,先将培养瓶从培养箱中取出,在超净工作台中倒掉培养基,用无菌的 PBS 缓冲液轻轻清洗细胞 2 - 3 次,以去除残留的培养基和细胞代谢产物。然后加入适量的胰蛋白酶(一般 0.25% 胰蛋白酶为宜),使其覆盖细胞表面,放入 37℃培养箱中消化 1 - 3 分钟,具体消化时间根据细胞的状态和实验经验确定。当在显微镜下观察到细胞开始变圆并从培养瓶壁上脱落时,立即加入含有血清的培养基终止消化。轻轻吹打细胞悬液,使细胞分散均匀,按照合适的比例(如 1:2 或 1:3)进行传代接种到新的培养容器中,继续培养。

三、注意事项

无菌操作整个细胞培养过程必须严格遵守无菌操作原则。在超净工作台中进行操作时,应提前开启风机和紫外线灯进行消毒。操作人员需穿戴无菌工作服、手套和口罩,使用的器械和试剂等均需经过严格的灭菌处理。任何污染都可能导致细胞培养失败,因此要格外小心。

细胞冻存为了保证细胞的长期保存和后续使用,需进行细胞冻存。当细胞生长状态良好时,可将细胞消化后制成细胞悬液,加入适量的冻存液(一般包含血清和 DMSO 等),调整细胞密度至合适范围(如 1×10⁶ - 5×10⁶个 /ml)。将细胞悬液分装到冻存管中,标记好细胞名称、冻存日期等信息,然后按照一定的降温程序(如先在 4℃放置 30 分钟,再转移至 - 20℃放置 1 - 2 小时,最后放入 - 80℃冰箱过夜,次日可转移至液氮罐中长期保存)进行冻存。

定期检测定期对培养的 HNEpC 细胞进行检测,包括细胞形态观察、细胞活力检测、微生物污染检测等。如发现细胞形态异常、生长缓慢或出现污染迹象,应及时采取措施,如丢弃污染的细胞、排查污染原因等,以保证细胞培养的质量和实验结果的可靠性。

通过以上规范的操作和注意事项,能够有效地培养 HNEpC 细胞,为相关的研究和实验提供良好的细胞模型。

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小衡衡

简介:一个从事生物科技,专注于细胞相关技术、服务的打工仔